在培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行明場(chǎng)和熒光觀察細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，需要借助特定的儀器設(shè)備，并遵循一定的操作規(guī)范和注意事項(xiàng)，以確保能夠準(zhǔn)確、實(shí)時(shí)地捕捉到細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化。以下是相關(guān)介紹：

主要設(shè)備及特點(diǎn)

箱內(nèi)明場(chǎng) / 熒光多孔板活細(xì)胞工作站：可在培養(yǎng)箱環(huán)境中連續(xù)對(duì)多孔板中的活細(xì)胞進(jìn)行明場(chǎng)和熒光成像，通過移動(dòng)鏡頭對(duì)多孔板內(nèi)的細(xì)胞按區(qū)域依次成像，掃描結(jié)束后自動(dòng)拼接成全板完整圖像，避免挪動(dòng)培養(yǎng)板對(duì)細(xì)胞生理的干擾。該設(shè)備支持遠(yuǎn)程監(jiān)控和分析，硬件和電子器件能在 5-40°C 及 20-95% 的濕度環(huán)境下運(yùn)行，兼容 6-384 孔多孔培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿、T25-T225 培養(yǎng)瓶等多種透明培養(yǎng)容器。

全自動(dòng)活細(xì)胞監(jiān)控系統(tǒng)：可開放式地放在二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)，配備 4X、10X、20X 物鏡，具有紅、綠、藍(lán)三色熒光通道及明場(chǎng)通道，可同時(shí)進(jìn)行四個(gè)光通道的延時(shí)成像。采用科研級(jí)高感光 CCD，配有全自動(dòng)電動(dòng)載物臺(tái)，能實(shí)現(xiàn) Z 軸自動(dòng)聚焦、自動(dòng)熒光通道切換、自動(dòng)高通量圖像采集和疊加等功能，還可自主編輯并自動(dòng)批量生成視頻，自動(dòng)生成多種分析數(shù)據(jù)。

這是一種小型化培養(yǎng)箱內(nèi)熒光顯微鏡，支持 3 通道熒光，可通過 APP 遠(yuǎn)程監(jiān)控，適合中小規(guī)模實(shí)驗(yàn)，能夠在接近細(xì)胞生理環(huán)境下實(shí)時(shí)、動(dòng)態(tài)追蹤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)。

觀察方法及要點(diǎn)

明場(chǎng)觀察：利用普通的透射光照明，直接觀察細(xì)胞的形態(tài)、輪廓和運(yùn)動(dòng)情況。適用于觀察細(xì)胞的整體形態(tài)、遷移、增殖等較為宏觀的動(dòng)態(tài)變化。在培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行明場(chǎng)觀察時(shí)，要注意選擇合適的光源強(qiáng)度和物鏡倍數(shù)，以獲得清晰的圖像。

熒光觀察：首先需要對(duì)目標(biāo)細(xì)胞或分子進(jìn)行特異性熒光標(biāo)記，如用 CFSE 標(biāo)記細(xì)胞 A，CellTracker Red 標(biāo)記細(xì)胞 B，或者通過基因編輯讓細(xì)胞表達(dá)熒光蛋白等。然后選擇合適的熒光通道進(jìn)行觀察，可實(shí)時(shí)追蹤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞間的相互作用以及分子的動(dòng)態(tài)變化等。在熒光觀察過程中，要注意控制熒光激發(fā)光的強(qiáng)度和時(shí)間，避免對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生光毒性，影響細(xì)胞的正常運(yùn)動(dòng)和生理狀態(tài)。

數(shù)據(jù)分析：結(jié)合時(shí)間序列的明場(chǎng)和熒光圖像，可通過軟件量化細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的關(guān)鍵參數(shù)，如細(xì)胞的遷移速度、方向改變、運(yùn)動(dòng)軌跡等。例如，通過 TrackMate 插件可以追蹤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)軌跡，分析細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的速度和方向變化；利用 ImageJ 或 CellProfiler 等軟件可以計(jì)算熒光信號(hào)的強(qiáng)度變化、共定位系數(shù)等，從而進(jìn)一步了解細(xì)胞運(yùn)動(dòng)與細(xì)胞內(nèi)分子變化的關(guān)系。